熒光-PCR法是通過熒光染料或熒光標(biāo)記的特異性探針，對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo)記跟蹤，實(shí)時(shí)在線監(jiān)控反應(yīng)過程。PCR擴(kuò)增時(shí)加入一對(duì)引物和一個(gè)特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時(shí)，淬滅基團(tuán)抑制報(bào)告基團(tuán)的熒光發(fā)射。剛開始時(shí)，探針結(jié)合在DNA任意一條單鏈上，PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5’端－3’端外切酶活性將探針酶切降解，報(bào)告基團(tuán)與淬滅基團(tuán)發(fā)生分離，抑制作用被解除，從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)。隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行，反應(yīng)產(chǎn)物不斷累積，熒光信號(hào)強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過一個(gè)循環(huán)，收集一次熒光強(qiáng)度信號(hào)，這樣就可以通過熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測(cè)產(chǎn)物量的變化，結(jié)合相應(yīng)的軟件對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行分析進(jìn)而得到一條熒光擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線分熒光背景信號(hào)階段、熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺(tái)期三個(gè)階段。指數(shù)期的PCR產(chǎn)物量的對(duì)數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系，因此我們選擇在這個(gè)階段進(jìn)行定量分析，計(jì)算出待測(cè)樣品初始模版的量。